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一文輕松學會如何使用RT-PCR試劑盒
點擊次數(shù):6019 更新時間:2020-04-03
  RT-PCR試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法,由于其試劑穩(wěn)定,易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢。
  下面小編要為大家介紹的是RT-PCR試劑盒詳細操作規(guī)程:
  1、使用前請先將試劑盒在室溫下平衡半小時。
  2、空白孔不加樣,只加顯色劑A,B和終止液用于調(diào)零。
  3、標準品孔:每孔加入稀釋好的標準品50μl,零孔加入標準品/樣品稀釋液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必須要做,并將其作為標曲的后一個點)。
  4、樣品孔:加入樣品50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl。
  5、輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
  6、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。
  7、次洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  8、加入50μl親和素-HRP到標準品孔和樣品孔中,輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
  9、第二次洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  10、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
  11、終止:每孔加終止液50μl,終止反應。
  12、測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度,測定應在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
  13、計算:ADP試劑盒;RT-PCR試劑盒根據(jù)濃度和OD值算出標準曲線的回歸方程,建議用計算軟件進行計算,推薦使用ELISAcalc進行計算,擬合模型選用logistic曲線。
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